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單細(xì)胞膜片鉗記錄分析系統(tǒng)

 詳情說明
單細(xì)胞膜片鉗記錄分析系統(tǒng) 單細(xì)胞膜片鉗記錄分析系統(tǒng)是以單個(gè)細(xì)胞(培養(yǎng)或急性分離的)為實(shí)驗(yàn)材料,研究其細(xì)胞膜上離子通道的電流的變化規(guī)律。一套完整的單細(xì)胞記錄系統(tǒng)主要包括:
1 膜片鉗放大器系統(tǒng): 為膜片鉗記錄系統(tǒng)的核心,其特殊的電路設(shè)計(jì)能保障對微小通道電流的精確記錄。隨著技術(shù)的發(fā)展,膜片鉗放大器的自動化程度越來越高,適合于各種各樣的膜片鉗乃至其他電生理實(shí)驗(yàn)的記錄。系統(tǒng)包括:
膜片鉗放大器(Amplifier):美國MDS(Axon)公司提供系列的膜片鉗放大器系統(tǒng):MultiClamp 700B、Axopatch 200B。
數(shù)模轉(zhuǎn)換器(digitizer):用于對模擬信號和數(shù)碼信號進(jìn)行轉(zhuǎn)換。目前的數(shù)模/模數(shù)轉(zhuǎn)換器多為16位高分辨率、多通道采集。
美國Axon(MDS)公司的Digidata 1440A。 記錄和分析軟件(Software):用于采集并分析通道信號。美國Axon(MDS)公司的pClamp10集采集、分析、統(tǒng)計(jì)和作圖等功能于一身,是經(jīng)典的膜片鉗采樣分析軟件包。
2 微操縱器: 微操縱器主要是操作放大器的電極,調(diào)節(jié)記錄微電極的位置使之與細(xì)胞形成封接,或調(diào)節(jié)給藥電極或注射電極的位置,用于給細(xì)胞施加藥物或向細(xì)胞內(nèi)注射物質(zhì)。目前常見的生產(chǎn)廠家有美國Sutter公司、Burleigh公司、SD公司等,如美國Sutter公司的電動微操縱器MP-285、MPC-385、MP-225等。
微操器通常是國定在顯微鏡擴(kuò)展平臺上。
3 微電極拉制儀: 用于制備玻璃微電極。常見的有兩種:一種為垂直型微電極拉制儀,利用金屬絲(鎢絲或鉑絲)通過大電流將玻璃電極加熱到熔點(diǎn),通過重力拉斷,通常采用兩步法拉電極。常見的有美國Sutter公司的P-30 垂直微電極拉制儀。另一種是水平程控微電極拉制儀,采用微電腦控制,可設(shè)定拉力大小、拉制的時(shí)間、拉制的方式等參數(shù)。單步或多步拉制,拉制的電極形狀多種多樣,適合于所有電生理實(shí)驗(yàn)。加熱裝置用鉑片、鎢鈦合金、鎳鎘合金或激光,激光可拉制石英電極。常見的有美國Sutter公司的P-97 水平程控微電極拉制儀
4微電極拋光儀: 微電極拉制儀拉出的電極,電極的尖端往往不是很光滑。為了能與細(xì)胞膜間形成穩(wěn)定可靠的封接,一般拉制出的微電極需要進(jìn)行拋光處理(全細(xì)胞記錄有時(shí)可不需要拋光),此時(shí)需要使用拋光儀。在單通道實(shí)驗(yàn)中還需要在微電極尖端涂上疏水硅膠樹脂(Sylgard)以減小跨壁電容(Transmural capacitance)帶來的噪聲。常見的有日本Narishige公司的MF-830型、美國WPI公司的MF200。
5 給藥系統(tǒng): 研究離子通道時(shí),觀察藥物的作用是基本的實(shí)驗(yàn)方法,依據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛯?shí)驗(yàn)材料的不同,選用合適的給藥系統(tǒng)是非常重要的。常見的廠家有美國ALA公司、Warner公司、WPI公司,法國Bio-logic公司。如美國ALA公司的BPS-4/8PG型4/8道手動灌流系統(tǒng)、DAD-8/16VCP系列程控灌流系統(tǒng),法國Bio-logic公司RSC-200快速給藥系統(tǒng)。
6 細(xì)胞恒溫記錄槽系統(tǒng): 在膜片鉗實(shí)驗(yàn)中,常常需要將細(xì)胞或腦片/組織片保持在一個(gè)相對恒溫系統(tǒng)中,以保持標(biāo)本活性。該系統(tǒng)包含細(xì)胞記錄槽和溫度控制儀兩方面。細(xì)胞(腦片/組織片)記錄槽是放置標(biāo)本的浴槽,根據(jù)標(biāo)本以及實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?,其型號也各異,容量大小與設(shè)計(jì)也不同。,恒溫控制儀是控制細(xì)胞槽,使其保持一個(gè)恒定的溫度。常見的有美國Warner公司的和RC系列細(xì)胞記錄槽和 TC-324B、TC344B我溫度控制儀。以及美國Dagan公司的PID-10、HCC-100A等。
7 蠕動泵: 用于將液體灌流給標(biāo)本,維持標(biāo)本的營養(yǎng),保證其活性。通常跟細(xì)胞恒溫槽系統(tǒng)連接在一起。其種類繁多,國產(chǎn)進(jìn)口均有。國產(chǎn)的如河北蘭格公司LEAD-1型,國外的如美國WPI公司的Peri-Star型蠕動泵。
8 防震臺與屏蔽網(wǎng): 在膜片鉗實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞膜和記錄電極尖端封接后,震動極易使封接斷開,從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。所以,整個(gè)實(shí)驗(yàn)使用防震臺來減小震動顯得非常重要。同時(shí),靜電屏蔽網(wǎng)是防止雜電場(如日光燈,電腦等)對膜片鉗放大器探頭電路產(chǎn)生干擾的重要手段。常見國外廠家有美國TMC公司,國內(nèi)的有多家加工生產(chǎn)。常用的美國TMC公司的TMC63544型是一臺性能優(yōu)良的防震臺,適用于膜片鉗、細(xì)胞注射、光學(xué)、激光共聚焦顯微鏡等各種需要防震的實(shí)驗(yàn)中。
9 倒置顯微鏡: 目前我國市場上膜片鉗實(shí)驗(yàn)常用的顯微鏡來自日本的Olympus和Nikon兩大品牌,少數(shù)來自德國Leica與Zeiss公司。日本Olympus IX51/71/81是適合于進(jìn)行單細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)的類型。
10 監(jiān)視系統(tǒng): 該系統(tǒng)是有攝像頭和監(jiān)視器兩部分組成,其主要目的是為了觀看細(xì)胞和電極。以減輕操作者的長時(shí)間觀看顯微鏡而帶來的疲勞和實(shí)驗(yàn)教學(xué) 。
11 計(jì)算機(jī): 用于采集、儲存與分析數(shù)據(jù)。目前市售的品牌電腦均可。
12 其它儀器: 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?,需選用一些儀器,如電刺激器和隔離器,特殊的給藥系統(tǒng),滲透壓儀,一些常用的耗材和放置儀器的儀器架。
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